在掃描電子顯微鏡（SEM）中，冷臺（Cryo Stage）是用于實現(xiàn)低溫成像的關(guān)鍵組件，特別適合于成像熱敏樣品（如生物樣品、液態(tài)樣品或聚合物）。通過將樣品冷凍到低溫，冷臺可以減少樣品的蒸發(fā)、分解或損傷，同時抑制樣品的運動和結(jié)構(gòu)變化，從而獲得更高質(zhì)量的圖像。以下是通過冷臺實現(xiàn)低溫成像的原理和步驟：

1. 冷臺的工作原理

冷臺通過液氮、液氦或壓縮制冷系統(tǒng)將樣品降至低溫度（通常為-150°C到-196°C），從而維持樣品的穩(wěn)定性。這種低溫環(huán)境能夠：

防止樣品變形：低溫可以防止樣品在高真空環(huán)境下由于水分蒸發(fā)而收縮或變形。

減少樣品損傷：許多生物樣品和有機材料在常溫下易受電子束損傷，而低溫環(huán)境能夠顯著減少這一效應(yīng)。

保持樣品的結(jié)構(gòu)和水分：冷凍可以保持生物樣品的自然水分含量，避免其脫水。

2. 冷凍樣品的準(zhǔn)備

在進(jìn)行低溫成像之前，樣品通常需要經(jīng)過以下步驟進(jìn)行處理：

樣品冷凍：

快速冷凍：樣品通常通過浸入液氮或其他快速冷卻媒介進(jìn)行快速冷凍（稱為“冷凍固定”），以避免形成冰晶。冰晶會破壞樣品的結(jié)構(gòu)，影響成像質(zhì)量。冷凍固定：生物樣品和液態(tài)樣品通過快速冷卻避免冰晶形成，維持其原始的微觀結(jié)構(gòu)。

冷凍保護(hù)劑：對于某些樣品，可以使用冷凍保護(hù)劑（如甘油、蔗糖等）來防止在冷凍過程中形成大冰晶。

預(yù)處理和鍍膜：

冷凍斷裂：有些樣品會在冷凍后進(jìn)行冷凍斷裂處理，通過物理破裂暴露內(nèi)部結(jié)構(gòu)，然后進(jìn)行成像。

冷凍涂層：為了避免樣品表面電荷積累，可以在低溫下對樣品進(jìn)行金或鉑的薄層鍍膜。這可以增強樣品的導(dǎo)電性，獲得更清晰的圖像。

3. 冷臺的安裝和使用步驟

安裝冷臺并進(jìn)行低溫成像時，通常需要遵循以下步驟：

安裝冷臺：

冷臺安裝：首先在SEM腔室內(nèi)安裝冷臺，將其與冷卻系統(tǒng)連接。冷臺的安裝位置要確保能夠與SEM的樣品臺配合，方便電子束掃描和探測器成像。

冷卻劑準(zhǔn)備：確保液氮或其他冷卻劑充足，冷卻系統(tǒng)正常運行。

溫度監(jiān)控：冷臺配有溫度監(jiān)控器，實時監(jiān)測和調(diào)節(jié)樣品溫度，確保溫度穩(wěn)定在設(shè)定的低溫范圍內(nèi)。

樣品加載：

冷凍樣品裝載：在液氮等低溫環(huán)境中將冷凍好的樣品裝載到冷臺上，避免樣品升溫或被污染。通常使用冷凍轉(zhuǎn)移工具，確保樣品在轉(zhuǎn)移過程中保持低溫。

避免污染：在樣品轉(zhuǎn)移和裝載過程中，要特別注意防止樣品表面與空氣中的水汽接觸，以避免冷凝和污染。

SEM成像：

啟動SEM：在冷臺穩(wěn)定運行后，啟動SEM進(jìn)行成像。低溫環(huán)境下，電子束的參數(shù)通常需要調(diào)整：降低電子束電壓：低溫條件下，樣品更容易損壞，因此通常使用較低的電子束電壓以減少電子束的損傷。

調(diào)整掃描速度：適當(dāng)減慢掃描速度，增加信號收集時間，以獲得更清晰的圖像。

溫度控制：在成像過程中，持續(xù)監(jiān)控和調(diào)節(jié)冷臺的溫度，確保溫度波動不會影響樣品的穩(wěn)定性。

4. 低溫成像的優(yōu)勢

使用冷臺進(jìn)行低溫成像具備以下優(yōu)勢：

減少電子束損傷：低溫環(huán)境下，電子束對樣品的損傷大大降低，特別是對于生物樣品和聚合物等易受熱敏感材料。

防止樣品蒸發(fā)和變形：樣品在高真空條件下的水分蒸發(fā)問題通過冷臺得到有效抑制，尤其對濕潤樣品（如細(xì)胞、組織等）有很大幫助。

提高圖像質(zhì)量：低溫下樣品的穩(wěn)定性增強，可以獲得更高分辨率和更清晰的圖像。

5. 常見問題與解決方案

在低溫成像過程中，可能遇到以下問題：

冰晶形成：如果樣品冷凍不當(dāng)，可能形成冰晶，影響樣品結(jié)構(gòu)和圖像質(zhì)量。使用快速冷凍技術(shù)和冷凍保護(hù)劑可以避免這種情況。

樣品污染：由于樣品表面可能與空氣中的水分接觸，形成冷凝污染。通過冷凍轉(zhuǎn)移工具和嚴(yán)密的樣品轉(zhuǎn)移流程可以避免污染。

溫度不穩(wěn)定：如果冷臺溫度不穩(wěn)定，可能導(dǎo)致樣品熱脹冷縮，從而影響成像質(zhì)量。確保冷臺冷卻系統(tǒng)的穩(wěn)定性和精確的溫控是關(guān)鍵。

6. 應(yīng)用領(lǐng)域

低溫成像在以下領(lǐng)域具有重要應(yīng)用：

生物樣品成像：如細(xì)胞、組織和蛋白質(zhì)的超微結(jié)構(gòu)成像。低溫成像可以保持樣品的原始狀態(tài)，避免樣品脫水和形變。

聚合物和柔性材料：低溫成像可以防止高真空環(huán)境下柔性材料的收縮和分解，獲得更精確的表面形態(tài)。

液態(tài)樣品分析：通過冷凍液態(tài)樣品，避免在真空條件下液體蒸發(fā)，保留其原始形態(tài)進(jìn)行分析。

以上就是澤攸科技小編分享的如何在掃描電鏡中通過冷臺實現(xiàn)低溫成像。更多掃描電鏡產(chǎn)品及價格請咨詢15756003283(微信同號)。