掃描電子顯微鏡(SEM)之化學(xué)方法制備樣品
日期:2021-03-26
掃描電子顯微鏡(SEM)之化學(xué)方法制備樣品,下面澤攸科技小編為大家介紹一下如何使用化學(xué)方法制備樣品。
化學(xué)方法制備樣品的程序通常是:清洗、化學(xué)固定、干燥、噴鍍金屬。
1、清洗:某些生物材料表面常附血液、細(xì)胞碎片、消化道內(nèi)的食物殘?jiān)?、?xì)菌、淋巴液及粘液等異物,掩蓋著要觀察的部位,因而,需要在固定之前用生理鹽水或等滲緩沖液等把附著物清洗干凈。亦可用5%碳酸鈉沖洗或酶消化法去除這些異物。
2、固定:通常采用醛類(主要是戊二醛和多聚甲醛)與四氧化鋨雙固定,也可用四氧化鋨單固定。四氧化鋨固定不僅可良好地保存組織細(xì)胞結(jié)構(gòu),而且能增加材料的導(dǎo)電性和二次電子產(chǎn)額,提高掃描電子顯微圖象的質(zhì)量。這對(duì)高分辨掃描電子顯微術(shù)是重要的。為增強(qiáng)這種效果,可用四氧化鋨-單寧酸或是四氧化鋨-珠叉二胼等反復(fù)處理材料,使其結(jié)合更多的重金屬鋨,這就是導(dǎo)電染色。
3、干燥:固定后通常采用臨界點(diǎn)干燥法。其原理是:適當(dāng)選擇溫度和壓力,使液體達(dá)到臨界狀態(tài)(液態(tài)和氣相間界面消失),從而避免在干燥過程中由水的表面張力所造成的樣品變形。對(duì)含水生物材料直接進(jìn)行臨界點(diǎn)干燥時(shí),水的臨界溫度和壓力不能過高(37.4℃,218帕)。通常用乙醇或丙酮等使材料脫水,再用一種中間介質(zhì),如醋酸戊酯,置換脫水劑,然后在臨界點(diǎn)干燥器中用液體或固體二氧化碳、氟利昂13以及一氧化二氮等置換劑置換中間介質(zhì),進(jìn)行臨界干燥。
4、噴鍍金屬:將干燥的樣品用導(dǎo)電性好的粘合劑或其他粘合劑粘在金屬樣品臺(tái)上,然后放在真空蒸發(fā)器中噴鍍一層50~300埃厚的金屬膜,以提高樣品的導(dǎo)電性和二次電子產(chǎn)額,改善圖象質(zhì)量,并且防止樣品受熱和輻射損傷。如果采用離子濺射鍍膜機(jī)噴鍍金屬,可獲得均勻的細(xì)顆粒薄金屬鍍層,提高掃描電子圖象的質(zhì)量。
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作者:小攸